» » » Количественное определение факторов свертывания VIII и IX

Медицинская библиотека
Медицинские статьи
Медицинская литература и книги
 
 
 

Количественное определение факторов свертывания VIII и IX - медицинская статья, новость, лекция

Читать медицинскую статью, новость, лекцию по медицине: «Количественное определение факторов свертывания VIII и IX» размещена 6-04-2016, 19:05, посмотрело: 690

0

Количественное определение факторов свертывания VIII и IXКоличественное определение факторов свертывания VIII и IX

 

 

Для количественного определения факторов свертывания VIII и IX устанавливается каолин-кефалиновое время разведенной бедной тромбоцитами плазмы крови больного и стандартной контрольной плазмы, полученной от группы здоровых лиц.

Обусловленное разведением снижение концентрации всех плазменных факторов свертывания, кроме исследуемых, компенсируется добавлением плазмы крови больного с заведомо известным выраженным дефицитом факторов VIII и IX. В качестве активаторов используются кефалин или другие заменители фактора III тромбоцитов и каолин. Добавление кефалина (эритрофосфатида) исключает нарушения свертывания тромбоцитарного генеза и делает метод чувствительным к дефициту плазменных факторов свертывания и к избытку в плазме антикоагулянтов. Каолин используется для активации контактной фазы свертывания. В результате на показаниях теста отражается лишь дефицит исследуемого фактора. При помощи стандартной кривой разведения определяется степень дефицита факторов VIII и IX.

 

Используемые реактивы

Каолин - белая глина

Для количественного определения факторов свертывания VIII и IX используются следующие реактивы:

  1. Субстратная дефицитная плазма. Используется бедная тромбоцитами плазма крови больных тяжелыми формами гемофилии А и В с установленным резко выраженным дефицитом факторов VIII и IX. (1-3%) получаемая при центрифугировании крови в течении 15 минут при 2000 g. В качестве консерванта используют 3,8-процентный раствор цитрата натрия (9:1). Для получения больших количеств субстратной плазмы целесообразно провести больным тяжелой формой гемофилии А и В плазмаферез, позволяющий получить 250 мл плазмы из 500 мл крови больного.
  2. Стандартная плазма. Контрольную бедную тромбоцитами плазму заготавливают так же, как и плазму крови исследуемых больных и субстратную плазму. Поскольку у здоровых лиц содержание в крови факторов VIII и IX колеблется в значительных пределах, целесообразно использовать пул донорской плазмы, состоящий из равных объемов 10-20 образцов плазмы крови здоровых лиц. Образцы стандартной и субстратной плазм хранятся не более трех часов при 4°С или в течение 1 месяца при -20°С
  3. Взвесь каолина (белой глины) в эритрофосфатиде. Используется 0,1-процентный раствор эритрофосфатида в изотоническом растворе (0,85) хлорида натрия. Готовится взвесь 0,025 г каолина (для его измельчения используется лабораторная агатовая ступка) в 0,5 мл 0,1% раствора эритрофосфатида и объем доводится до 5 мл изотопическим раствором хлорида натрия. Полученную взвесь перемешивают в течение 10 минут на магнитной мешалке при комнатной температуре.
  4. Имидазольный буфер pH 7,4 готовится из концентрата (5 мл концентрата + 95 мл дистиллированной воды).
  5. Раствор хлорида кальция 0,025 моль/л.

 

Ход определения

Разведения стандартной плазмы
Разведения, мл

1-9

1:10

1-19

1:20

1-39

1:40

1-99

1:100

1-199

1:200

% фактора VIII, IX 100% 50% 25% 10% 5%

Все образцы плазм сохраняются на льду в течение всего времени исследования. Определение проводится в стандартных условиях pH (имидазольный буфер), контактной (каолин) и фосфолипидной (кефалин или эритрофосфатид) активации процесса свертывания. В центрифужные пробирки, установленные на водяной бане (37°С), последовательно вводят но 0,1 мл разведенной буфером нитратной плазмы больного (1:10), субстратной плазмы и взвеси каолина в эритрофосфатиде. Содержимое пробирок тщательно перемешивают и инкубируют на водяной бане в течении 3 минут. Затем вводят 0,1 мл раствора хлорида кальция и определяют время свертывания.

 

Построение калибровочной кривой

Для построения кривой используют указанные выше разведения стандартной плазмы.

 

Чтение результатов

Время свертывания стандартной контрольной плазмы, разведенной имидазольным буфером в соотношении 1:10 принимается за 100%. На билогарифмической бумаге по оси ординат откладывают время свертывания в секундах, а при оси абсцисс уровень дефицитного VIII или IX фактора в процентах. Угол наклона кривой зависит от качества субстратной плазмы. Нормальное значение факторов VIII и IX составляет 70-200%.

Метод используется для диагностики дефицита факторов VIII и IX, определения тяжести гемофилии и контроля за заместительной терапией больных трансфузиями плазмы или концентратами соответствующих факторов свертывания.


Автор(ы): Lothr




Понравилась медицинская статья, новость, лекция по медицине из категории
«Гематология и Болезни крови / Лабораторная и Функциональная диагностика / Трансфузиология»:

Количественное определение факторов свертывания VIII и IX

поделись в:



HTML-cсылка
BB-cсылка
Прямая ссылка

Категория: Гематология и Болезни крови / Лабораторная и Функциональная диагностика / Трансфузиология

Уважаемый посетитель, Вы зашли на сайт как незарегистрированный пользователь.
Мы рекомендуем Вам зарегистрироваться либо войти на сайт под своим именем.

Добавление комментария
Имя:*
E-Mail:
Комментарий:
Введите два слова, показанных на изображении: *